實(shí)驗(yàn)室里,使用高數(shù)值孔徑(高放大率)物鏡時(shí)效果最高,而使用低數(shù)值孔徑物鏡時(shí)效果幾乎不明顯
蓋玻片有各種尺寸,下表總結(jié)了可用厚度:
序號(hào) | 厚度(mm) |
---|---|
#0 | 0.08 – 0.13 |
#1 | 0.13 – 0.16 |
#1.5 | 0.16 – 0.19 |
#2 | 0.19 – 0.25 |
#3 | 0.25 – 0.35 |
#4 | 0.43 – 0.64 |
大多數(shù)顯微鏡物鏡上刻有最佳的蓋玻片厚度。對(duì)于大多數(shù)物鏡,是0.17毫米。
正確的蓋玻片厚度對(duì)于給定物鏡的最佳分辨率非常重要。但不要去買更貴的0.17mm蓋玻片,要買更薄、更便宜的(將在下面解釋)。
一般來(lái)說(shuō),物鏡的數(shù)值孔徑越大,如果使用了錯(cuò)誤的蓋玻片厚度,分辨率損失就越嚴(yán)重。對(duì)于一些大口徑物鏡,只有幾微米厚的蓋玻片可以顯著降低分辨率。因此,一些更高級(jí)的物鏡有一個(gè)校正環(huán)。這是一個(gè)調(diào)整環(huán),可以轉(zhuǎn)動(dòng)它來(lái)調(diào)整物鏡,使其符合正在使用的實(shí)際蓋玻片厚度。
許多物鏡的最佳蓋玻片厚度為0.17mm?,F(xiàn)在,為什么最常見(jiàn)的蓋玻片是#1(0.13-0.16mm),比計(jì)算出的最佳值還要???
答案有點(diǎn)復(fù)雜:蓋玻片的厚度不是唯一重要的參數(shù)。
試樣嵌入封片中。這種封片的厚度必須加到玻璃罩的厚度上。位于封片深處的試樣比位于蓋玻片正下方的試樣具有更大的“有效”蓋玻片厚度。
因此,計(jì)算出的(理想)蓋玻片厚度為0.17mm是一個(gè)很好的折衷方案,即使“真正的”蓋玻片更薄。
另外,封片的折射率也起作用。
用于非關(guān)鍵常規(guī)觀測(cè)的廉價(jià)蓋玻片將顯示不同厚度的統(tǒng)計(jì)分布。也有各種各樣的蓋玻片,顯示出更窄的厚度分布。有些人買便宜的蓋玻片,然后用卡尺手動(dòng)測(cè)量其厚度來(lái)分類。
值得這樣嗎?當(dāng)使用低數(shù)值孔徑的低倍物鏡時(shí),蓋玻片厚度的差異甚至可能不明顯,而且更昂貴的預(yù)選蓋玻片可能僅在需要高分辨率且物鏡不具有校正環(huán)的特定應(yīng)用中才有必要。
BTW,封片的厚度和折射率也會(huì)對(duì)分辨率產(chǎn)生影響,封片的厚度可能更難標(biāo)準(zhǔn)化。